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NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-131-SSA1-1995, BIENES Y SERVICIOS, ALIMENTOS PARA LACTANTES Y NIÑOS DE CORTA EDAD. DISPOSICIONES Y ESPECIFICACIONES SANITARIAS Y NUTRIMENTALES. - 17/12/1997
APENDICE NORMATIVO B
B. DE LOS METODOS DE PRUEBA
Numeral 1

 
     
 

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1 DETERMINACION DE PROTEINA CRUDA (METODO KJELDAHL-GUNNING)

1.1 FUNDAMENTO

LAS PROTEINAS Y DEMAS MATERIAS ORGANICAS SON OXIDADAS POR EL ACIDO SULFURICO Y EL NITROGENO ORGANICO DE LAS PROTEINAS SE FIJA COMO SULFATO DE AMONIO; ESTA SAL SE HACE REACCIONAR CON UNA BASE FUERTE PARA DESPRENDER AMONIACO QUE SE DESTILA Y SE RECIBE EN UN ACIDO DEBIL, EN EL CUAL SE PUEDE TITULAR EL AMONIACO CON UN ACIDO FUERTE. EN ESTE METODO DE KJELDAHL-GUNNING, SE USA EL SULFATO DE COBRE COMO CATALIZADOR Y EL SULFATO DE SODIO PARA AUMENTAR LA TEMPERATURA DE LA MEZCLA Y ACELERAR LA DIGESTION.

1.2 MATERIAL

MATRAZ DE KJELDAHL DE 800 ML

MATRAZ ERLENMEYER DE 500 ML

BURETA DE 50 ML

PIPETAS VOLUMETRICAS DE 5 ML

PROBETA

CUERPOS DE EBULLICION

BALANZA ANALITICA CON SENSIBILIDAD DE 0,1 MG

DIGESTOR-DESTILADOR DE KJELDAHL

1.3 REACTIVOS

ACIDO SULFURICO (H2SO4)

SULFATO DE COBRE (CUSO4 5 H2o)

GRANALLA DE ZINC (MALLA 20)

SULFATO DE SODIO ANHIDRO (NA2SO4)

ACIDO BORICO AL 4% EN AGUA (H3BO3)

SOLUCION CONCENTRADA DE HIDROXIDO DE SODIO 1:1 M/V (NAOH)

ACIDO CLORHIDRICO 0,1 N (HCL)

1.3.1 INDICADOR DE WESSLOW

1.3.1.1 ROJO DE METILO AL 0,2% EN UNA MEZCLA DE 60 ML DE ALCOHOL ETILICO Y 40 ML DE AGUA (CH3)NC6H4N=NC6H4COOH Y C2H5oH Y H2o.

1.3.1.2 AZUL DE METILENO AL 0,2 % EN AGUA C16H18N3SCL.CL2ZN.H2o.

MEZCLAR DOS PARTES DE 1.3.1.1 Y UNA PARTE DE 1.3.1.2.

1.4 PROCEDIMIENTO

MEDIR CON UNA PIPETA VOLUMETRICA 5 ML DE MUESTRA EN UN MATRAZ DE KJEDAHL, AGREGAR 2 G DE SULFATO DE COBRE, 10 G DE SULFATO DE SODIO ANHIDRO, 25 ML DE ACIDO SULFURICO Y UNOS CUERPOS DE EBULLICION; COLOCAR A BAJA TEMPERATURA, HASTA QUE TODO EL MATERIAL ESTE CARBONIZADO Y AUMENTAR GRADUALMENTE LA TEMPERATURA HASTA QUE EL CONTENIDO DEL MATRAZ ESTE COMPLETAMENTE CLARO, DEJAR POR 30 MINUTOS MAS.

DEJAR ENFRIAR Y AGREGAR 400 ML DE AGUA DESTILADA PARA DISOLVER COMPLETAMENTE EL RESIDUO DEL MATRAZ; DEJAR ENFRIAR, AGREGAR 6-7 GRANALLAS DE ZINC, ESTRATIFICANDO, Y SIN AGITAR, AGREGAR 50 ML DE SOLUCION DE HIDROXIDO DE SODIO. CONECTAR EL MATRAZ AL DESTILADOR Y RECIBIR EL DESTILADO EN UN MATRAZ ERLENMEYER DE 500 ML, QUE CONTENGA 50 ML DE ACIDO BORICO Y UNAS GOTAS DEL INDICADOR DE WESSLOW (LA PARTE TERMINAL DEL TUBO DEL DESTILADOR DEBE ESTAR DENTRO DEL ACIDO). DESTILAR HASTA APROXIMADAMENTE 300 ML. RETIRAR EL MATRAZ Y TITULAR CON ACIDO CLORHIDRICO 0,1 N.

1.5 CALCULOS

G/L DE PROTEINAS =

EN DONDE:

V = ML DE ACIDO CLORHIDRICO 0,1 N REQUERIDOS EN LA TITULACION

N = NORMALIDAD DEL ACIDO CLORHIDRICO

M = ML DE MUESTRA

6,38 = FACTOR PARA CONVERTIR NITROGENO A PROTEINAS DE LA LECHE

1.6 SEGUN EL METODO DE KJELDAHL PARA DETERMINAR EL CONTENIDO DE NITROGENO TOTAL (N2) DE LA FORMULA, SEGUIDO DEL CALCULO DEL CONTENIDO DE PROTEINA CRUDA COMO SIGUE:

N2 X FACTOR = PROTEINA CRUDA

FACTORES QUE DEBEN USARSE

PROTEINA DE TRIGO 5,70

PROTEINA DE SOJA 6,25

PROTEINA DERIVADA DE LA LECHE 6,38

PROTEINAS MIXTAS:

CUANDO EL ALIMENTO CONTIENE MAS DE POR EJEMPLO EL 90% (PESO SECO) DE PROTEINA DE TRIGO, SOJA O DERIVADA DE LECHE, EL FACTOR PROTEINA DEBE SER 5,70; 6,25 Y 6,38 RESPECTIVAMENTE.

CUANDO EL ALIMENTO ESTA CONSTITUIDO POR UNA CANTIDAD IMPORTANTE CONOCIDA (POR EJEMPLO 80%) DE PESO SECO DE PROTEINA DE TRIGO, SOJA O DERIVADA DE LECHE, EL FACTOR PARA DICHA PROTEINA DEBE SER EL FACTOR APROPIADO SEGUN SE INDICA ARRIBA. CUANDO LA PROTEINA REMANENTE ESTA CONSTITUIDA POR UNA MEZCLA DESCONOCIDA DE ESTAS PROTEINAS, DEBE APLICARSE EL FACTOR 6,25 A LA CANTIDAD REMANENTE DE PROTEINA.

CUANDO SE CONOCE LA CANTIDAD DE CADA UNA DE LAS PROTEINAS DE TRIGO, DE SOJA O DERIVADA DE LECHE CONTENIDA EN EL ALIMENTO, EL FACTOR PROTEINA EMPLEADO DEBERA SER EL DERIVADO PROPORCIONALMENTE USANDO LOS FACTORES ARRIBA CITADOS.

1.7 LOS RESULTADOS SE EXPRESAN COMO G DE PROTEINA CRUDA POR 100 G DEL ALIMENTO TAL COMO SE VENDE Y POR 100 KCAL.

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